隨著酶聯(lián)免疫分析技術(shù)在醫(yī)學(xué)及生物學(xué)領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用，體外檢測(cè)各種細(xì)胞因子及抗體研究有了新的突破。面對(duì)不同的實(shí)驗(yàn)我們?cè)鯓硬拍艿玫礁玫膶?shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)？今天我們就和大家說說ELISPOT基本知識(shí)及試劑盒選擇的幾個(gè)要素。

酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)檢測(cè)（ELISPOT）是將細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)和ELISA技術(shù)相結(jié)合，可以原位地檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞體外分泌蛋白的高靈敏分析技術(shù)。該技術(shù)集高靈敏度、高可信度、高通量、單細(xì)胞水平、功能性檢測(cè)與低成本等諸多優(yōu)點(diǎn)于一身。根據(jù)研究目的及檢測(cè)蛋白類型，可分為T細(xì)胞ELISPOT和B細(xì)胞ELISPOT兩種類型。其中T細(xì)胞ELISPOT主要用于檢測(cè)刺激后細(xì)胞所分泌的痕量細(xì)胞因子，而B細(xì)胞ELISPOT主要用于檢測(cè)抗體分泌B細(xì)胞的頻率。ELISPOT是用抗體或抗原捕獲培養(yǎng)細(xì)胞分泌的蛋白，并以酶聯(lián)斑點(diǎn)顯色的方法將其表現(xiàn)出來。

本文結(jié)合達(dá)優(yōu)^?預(yù)包被ELISPOT試劑盒，將T細(xì)胞ELISPOT檢測(cè)細(xì)胞因子的基本原理說明如下：

• 特異性單抗包被在培養(yǎng)孔底部，通過非特異性蛋白溶液封閉多余空白位點(diǎn)；
  

• 加入單個(gè)細(xì)胞懸液及刺激物培養(yǎng)，陽性細(xì)胞經(jīng)活化分泌細(xì)胞因子，細(xì)胞因子就近被特異性包被抗體捕獲；

• 移出細(xì)胞，板底留下細(xì)胞因子的“影像”；

• 加入酶標(biāo)記的檢測(cè)抗體，檢測(cè)抗體和 “影像”上的細(xì)胞因子結(jié)合，形成“抗體-抗原-抗體”夾心結(jié)構(gòu)；

• 加入顯色底物，在酶的催化分解下，生成不可溶的色素，沉淀在膜上，即形成斑點(diǎn)；斑點(diǎn)計(jì)數(shù)，結(jié)果分析。

ELISPOT試劑選擇三大要素

• 抗體對(duì)的特異性及親和性

ELISPOT檢測(cè)技術(shù)是通過兩種高親和力、高特異性的抗細(xì)胞因子單克隆抗體來檢測(cè)淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子情況的一種方法，對(duì)抗體對(duì)質(zhì)量和純度有著特殊的要求，因此勢(shì)必要選擇專業(yè)生產(chǎn)ELISPOT抗體對(duì)的公司。達(dá)優(yōu)^?系列預(yù)包被ELISPOT試劑盒根據(jù)不同檢測(cè)因子，從其中挑選最佳組合抗體對(duì)進(jìn)行生產(chǎn)。

不同來源抗體對(duì)檢測(cè)效果對(duì)比圖

• 高效封閉系統(tǒng)的選擇

不同的檢測(cè)樣本在板孔培養(yǎng)過程中，受各種實(shí)驗(yàn)條件影響，如果封閉不當(dāng)都可能產(chǎn)生非特異性顯色，導(dǎo)致非特異性斑點(diǎn)的產(chǎn)生或者背景顏色的加重。這將直接影響到最后結(jié)果的判斷分析。達(dá)優(yōu)^?系列產(chǎn)品通過大量實(shí)驗(yàn)，對(duì)不同來源、不同配方封閉方法進(jìn)行封閉效果的對(duì)比試驗(yàn)，篩選出更高效的封閉系統(tǒng)，并將之運(yùn)用到系列試劑盒產(chǎn)品中。

不同來源、配方封閉方案篩選對(duì)比圖    

• 酶聯(lián)信號(hào)放大系統(tǒng)的選擇

為實(shí)現(xiàn)ELISPOT檢測(cè)的高靈敏度，所用的信號(hào)放大系統(tǒng)——酶，要求純度高，催化反應(yīng)轉(zhuǎn)化率高、專一性強(qiáng)、性質(zhì)穩(wěn)定，制成的酶標(biāo)抗體也必須是性質(zhì)穩(wěn)定，且繼續(xù)保留活性部分和高效催化能力。對(duì)國際上不同公司開發(fā)的最新通用性高效酶標(biāo)抗體進(jìn)行對(duì)比性篩選試驗(yàn)，一直作為達(dá)優(yōu)^?系 列產(chǎn)品質(zhì)控及品質(zhì)升級(jí)的一項(xiàng)重要工作持續(xù)進(jìn)行，其首要目的就是保持試劑盒采用最佳的酶聯(lián)信號(hào)放大系統(tǒng)，達(dá)到最佳檢測(cè)效果。

不同來源酶聯(lián)信號(hào)放大系統(tǒng)篩選效果對(duì)比圖

看到了這里，想必大家對(duì)ELISPOT試劑盒選擇有了一個(gè)初步的了解，是不是在默默的想小達(dá)君你不厚道呀，說了這么久，也不來點(diǎn)ELISPOT試劑盒看看·······

各位客官別急，小達(dá)君這就為你們奉上~~

達(dá)優(yōu)^? ELISPOT產(chǎn)品列表

達(dá)優(yōu)^? ELISPOT輔助試劑

達(dá)優(yōu)^? ELISPOT讀板服務(wù)

達(dá)優(yōu)^? ELISPOT檢測(cè)服務(wù)

其它說明

• ELISPOT的檢測(cè)服務(wù)為實(shí)驗(yàn)上門服務(wù)，需要到客戶實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，差旅費(fèi)及食宿另行報(bào)價(jià)；

• 上述實(shí)驗(yàn)操作所需試劑及耗材由實(shí)驗(yàn)室自行準(zhǔn)備齊全，不在該服務(wù)報(bào)價(jià)中；

• 檢測(cè)方案及相關(guān)問題請(qǐng)具體咨詢；

• 報(bào)價(jià)具體費(fèi)用明細(xì)最終詳見服務(wù)合同。